來源：國家藥典委

 

 

我委擬制定包裝材料紅外光譜測定法、密度測定法、氣體透過量測定法和水蒸氣透過量測定法4個(gè)國家藥包材標(biāo)準(zhǔn)，為確保標(biāo)準(zhǔn)的科學(xué)性、合理性和適用性，現(xiàn)將擬制定的包裝材料紅外光譜測定法、密度測定法、氣體透過量測定法和水蒸氣透過量測定法4個(gè)國家藥包材標(biāo)準(zhǔn)第二次公示征求社會(huì)各界意見（詳見附件）。公示期為一個(gè)月。請(qǐng)相關(guān)單位認(rèn)真研核，若有異議，請(qǐng)及時(shí)來函提交反饋意見，并附相關(guān)說明、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和聯(lián)系方式。來函需加蓋公章，收文單位為“國家藥典委員會(huì)辦公室”，同時(shí)將公函掃描件電子版發(fā)送至指定郵箱。公示期滿未回復(fù)意見即視為對(duì)公示標(biāo)準(zhǔn)草案無異議。

 

聯(lián)系人：康笑博

電 話：010-67079620

電子郵件：421@chp.org.cn

收文單位：國家藥典委員會(huì)辦公室

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郵 編：100061

 

附件：包裝材料紅外光譜測定法公示稿（第二次）.pdf

密度測定法公示稿（第二次）.pdf

氣體透過量測定法公示稿（第二次）.pdf

水蒸氣透過量測定法公示稿（第二次）.pdf

 

包裝材料紅外光譜測定法

紅外分光光度法是在一定波數(shù)范圍內(nèi)測定物質(zhì)的吸收光譜，主要用于藥品包裝材料的鑒 別。藥品包裝材料的紅外光譜檢測方法有透射和衰減全反射(Attenuated Total Reflection， ATR)等。透射是指通過測定透過供試品前后的紅外光強(qiáng)度變化，得到紅外透射光譜。衰減 全反射是指紅外光以一定的入射角度通過 ATR 晶體后，在與晶體緊貼的供試品表面經(jīng)過多 次反射而得到反射光譜圖，可分為單點(diǎn)衰減全反射和平面衰減全反射。透射法一般測定 4000-400cm-1 波數(shù)范圍內(nèi)的吸收光譜，衰減全反射法一般測定 4000-650cm-1 波數(shù)范圍內(nèi)的吸 收光譜。

 

儀器及其校正

儀器及其校正照紅外分光光度法(通則 0402)要求。

供試品的制備及測定 通常采用熱敷法、膜法、熱裂解法、衰減全反射法、顯微紅外法等方法進(jìn)行測定。

 

第一法熱敷法

本法適用于塑料產(chǎn)品及粒料的紅外光譜測定。除另有規(guī)定外，將溴化鉀晶片或其它適宜

鹽片加熱后，趁熱將供試品輕擦于熱溴化鉀晶片或其它適宜鹽片上，以不冒煙為宜。常采用 透射法進(jìn)行測定。

 

第二法膜法

本法適用于塑料產(chǎn)品及粒料的紅外光譜測定。除另有規(guī)定外，取供試品適量，制成厚度 適宜均一的薄膜，常采用透射法進(jìn)行測定。常用的薄膜制備方式可采用熱壓成膜，或者加適 宜溶劑高溫回流使供試品溶解，趁熱將回流液涂在溴化鉀晶片上或其它適宜鹽片上，加熱揮 去溶劑等方式。

 

第三法熱裂解法

本法適用于橡膠產(chǎn)品的紅外光譜測定。除另有規(guī)定外，取供試品切成小塊，用適宜溶劑 抽提后烘干，再取適量置于玻璃試管底部后于酒精燈上加熱，當(dāng)裂解產(chǎn)物冷凝在玻璃試管冷 端時(shí)，用毛細(xì)管取裂解物涂在溴化鉀晶片或其它適宜鹽片上，立刻采用透射法進(jìn)行測定。

 

第四法衰減全反射法(ATR 法)

本法適用于塑料產(chǎn)品及粒料、橡膠產(chǎn)品的紅外光譜測定。除另有規(guī)定外，取表面清潔平 整的供試品適量，與衰減全反射棱鏡底面緊密接觸，采用衰減全反射法進(jìn)行測定。

 

第五法顯微紅外法

本法適用于多層膜、袋、硬片等產(chǎn)品的紅外光譜測定。除另有規(guī)定外，用切片器將供試 品切成厚度小于 50μm 的薄片，置于顯微紅外儀上觀察供試品橫截面，選擇所需檢測的區(qū)域， 進(jìn)行測定。

起草單位:上海市食品藥品包裝材料測試所 復(fù)核單位:江西省藥品檢驗(yàn)檢測研究院

電話:021-50798250

 

密度測定法

密度系指在規(guī)定溫度下單位體積物質(zhì)的質(zhì)量。溫度為 t°C時(shí)的密度用ρt 表示，單位為 kg/m3、g/cm3。密度是藥品包裝材料的特性之一，可用于藥品包裝材料的鑒別。

 

藥品包裝材料的密度一般采用浸漬法測定。浸漬法系指供試品在規(guī)定溫度的浸漬液中， 所受到浮力的大小，等于供試品排開浸漬液的體積與浸漬液密度的乘積。而浮力的大小可以 通過測量供試品的質(zhì)量與供試品在浸漬液中的質(zhì)量求得。

 

本法適用于除泡沫塑料以外的塑料容器(材料)的密度測定。

 

儀器

精度為 0.1mg 的天平，附密度測定裝置(溫度計(jì)的最小分度值為 0.5°C). 供試品的制備及測定供試品應(yīng)在 23°C±2°C，相對(duì)濕度 50%±5%環(huán)境中放置 4 小時(shí)以上，然后在此條件下進(jìn)行試驗(yàn)。供試品為除粉料以外的任何無氣孔材料，表面應(yīng)光滑平整、無凹陷，清潔，無裂縫，無氣泡等缺陷。尺寸適宜，供試品質(zhì)量不超過 2g。浸漬液應(yīng)選用新沸放冷水或其他適宜的液體，不與供試品作用的液體，必要時(shí)可加入潤濕劑，但應(yīng)小于浸漬液總體積的 0.1%，以除去小氣泡。在測試過程中，供試品與該液體接 觸時(shí)，對(duì)供試品應(yīng)無影響。供試品上端距浸漬液液面應(yīng)不小于 10mm，供試品表面不能粘附 空氣泡。浸漬液密度應(yīng)小于供試品密度;當(dāng)材料密度大于 1 時(shí)可選用水或者無水乙醇，當(dāng)材 料密度小于 1 時(shí)可選用無水乙醇。

 

取供試品適量，置于天平上，精密測定其在空氣中的質(zhì)量(a)，然后將供試品置于盛有 一定量已知密度(ρx)的浸漬液(水或無水乙醇)中，精密測定其質(zhì)量(b)，按下式計(jì)算 容器(材料)的密度。

 

 

【附注】水及無水乙醇在不同溫度下的密度見表 1、表 2。

 

 

氣體透過量測定法

本法用于測定藥用薄膜或薄片的氣體透過量。本法包括壓差法和電量分析法。電量分 析法僅適用于檢測氧氣透過量。

 

氣體透過量系指在恒定溫度和單位壓力差下，在穩(wěn)定透過時(shí)，單位面積和單位時(shí)間內(nèi) 透過供試品的氣體體積。通常以標(biāo)準(zhǔn)溫度和 1 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)大氣壓下的體積值表示，單位為: cm3/(m2·24h·0.1MPa)。

 

氣體透過系數(shù)系指在恒定溫度和單位壓力差下，在穩(wěn)定透過時(shí)，單位面積和單位時(shí)間 內(nèi)透過單位厚度供試品的氣體體積。通常以標(biāo)準(zhǔn)溫度和 1 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)大氣壓下的體積值表示， 單位為:cm3·cm/(m2·24h·0.1MPa)。

 

測試環(huán)境:溫度:(23±2) °C，相對(duì)濕度:(50±5) %

 

第一法 壓差法 藥用薄膜或薄片將低壓室和高壓室分開，高壓室充約 0.1MPa 的試驗(yàn)氣體，低壓室的體積已知。供試品密封后用真空泵將低壓室內(nèi)的空氣抽到接近零值。用測壓計(jì)測量低壓室的壓力增量 Dp ，可確定試驗(yàn)氣體由高壓室透過供試品到低壓室的以時(shí)間為函數(shù)的氣體量，但應(yīng)排除氣體透過速度隨時(shí)間而變化的初始階段。

 

儀器裝置 壓差法氣體透過量測定儀，主要包括以下幾部分: 透氣室 由上、下兩部分組成，當(dāng)裝入供試品時(shí)，上部為高壓室，用于存放試驗(yàn)氣體，裝有氣體進(jìn)樣管。下部為低壓室，用于貯存透過的氣體并測定透氣過程中的前后壓差。測壓裝置 高、低壓室應(yīng)分別有一個(gè)測壓裝置，高壓室的測壓裝置靈敏度應(yīng)不低于100Pa，低壓室測壓裝置的靈敏度應(yīng)不低于5Pa。

 

真空泵 應(yīng)能使低壓室的壓力不大于 10Pa。 試驗(yàn)氣體 純度應(yīng)大于 99.5%。

測定法 除另有規(guī)定外，選取厚度均勻，無褶皺、折痕、針孔及其他缺陷的適宜尺寸的供試品三片，在供試品朝向試驗(yàn)氣體的一面做好標(biāo)記，在 23±2 °C環(huán)境下，置于干燥器中， 放置 48 小時(shí)以上，用適宜的量具分別測量供試品厚度，精確到 0.001mm，每片至少測量 5 個(gè)點(diǎn)，取算術(shù)平均值。置儀器上，進(jìn)行試驗(yàn)。為剔除開始試驗(yàn)時(shí)的非線性階段，應(yīng)進(jìn)行 10 分鐘的預(yù)透氣試驗(yàn)，繼續(xù)試驗(yàn)直到在相同的時(shí)間間隔內(nèi)壓差的變化保持恒定，達(dá)到穩(wěn)定透過。

氣體透過量(Qg)可由儀器所帶的計(jì)算機(jī)分析軟件進(jìn)行直接計(jì)算得到，也可按下式計(jì)算：

 

 

第二法 電量分析法(庫侖計(jì)法)

供試品將透氣室分為兩部分。供試品的一側(cè)通氧氣，另一側(cè)通氮?dú)廨d氣。透過供試品的氧氣隨氮?dú)廨d氣一起進(jìn)入電量分析檢測儀中進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)并產(chǎn)生電壓，該電壓與單位時(shí) 間內(nèi)通過電量分析檢測儀的氧氣量成正比。

 

儀器裝置 電量分析法氣體透過量測定儀，儀器主要包括以下幾部分:

 

透氣室 由兩部分構(gòu)成，應(yīng)配有測溫裝置，還需裝配適宜的密封件，供試品測試面積根 據(jù)測試范圍調(diào)整，通常應(yīng)在 1cm2 到 150cm2 之間。

 

載氣 通常為氮?dú)饣蛘吆欢ū嚷实臍錃夂偷獨(dú)饣旌蠚狻?/span>

 

試驗(yàn)氣體 純度應(yīng)不低于 99.5%。 電量檢測器(庫侖計(jì)) 對(duì)氧氣敏感，運(yùn)行特性恒定，用來測量透過的氧氣量。測定法 除另有規(guī)定外，選取厚度均勻、平整、無褶皺、折痕、針孔及其他缺陷的適宜尺寸的供試品三片，在供試品朝向試驗(yàn)氣體的一面做好標(biāo)記，在 23°C±2°C環(huán)境下，置于干 燥器中，放置 48 小時(shí)以上，用適宜的量具測量供試品厚度，精確到 0.001mm，至少測量 5 個(gè)點(diǎn)，取算術(shù)平均值。將供試品放入透氣室，然后進(jìn)行試驗(yàn)，當(dāng)儀器顯示的值已穩(wěn)定一段 時(shí)間后，測試結(jié)束。

 

氧氣透過率(RO2)可由儀器所帶的計(jì)算機(jī)分析軟件進(jìn)行直接計(jì)算得到，也可按下式計(jì) 算:

 

 

水蒸氣透過量測定法

本法用于測定藥用包裝材料或容器的水蒸氣透過量，包括但不限于藥用薄膜或薄片及藥 用包裝容器的水蒸氣透過量測定。水蒸氣透過量系指在規(guī)定的溫度、相對(duì)濕度、一定的水蒸 氣壓差下，供試品在一定時(shí)間內(nèi)透過水蒸氣的量。

 

本法包括重量法、電解分析法和紅外檢測器法。如不同測試方法可適用，但測試結(jié)果不 一致時(shí)，應(yīng)以紅外檢測器法的測試結(jié)果為準(zhǔn)。

 

第一法 重量法

本法主要有基于干燥劑的增重法和基于水溶液的減重法來進(jìn)行測定的兩類方法。

 

1.增重法 測定在規(guī)定的溫度、相對(duì)濕度環(huán)境下，通過材料或容器透入的水蒸氣量,通 常用干燥劑的重量增重來計(jì)算。增重法通常又可分為杯式法和容器法兩種。

 

(1)杯式法 系指將供試品固定在特制的裝有干燥劑的透濕杯上，通過透濕杯的重量增 量來計(jì)算藥用薄膜或薄片的水蒸氣透過量。一般適用于水蒸氣透過量不低于 2 g/(m2·24h) 的薄膜或薄片。

 

儀器裝置

恒溫恒濕箱 溫度精度為±0.6°C;相對(duì)濕度精度為±2%;風(fēng)速為 0.5~2.5m/s;恒溫 恒濕箱關(guān)閉后，15 分鐘內(nèi)應(yīng)重新達(dá)到規(guī)定的溫、濕度。

 

分析天平 靈敏度為 0.1mg。

 

透濕杯 如圖 1。應(yīng)由質(zhì)輕、耐腐蝕、不透水、不透氣的材料制成;有效測定面積不得 低于 25 cm2。

 

試驗(yàn)條件 常用試驗(yàn)條件如下: A:溫度 23°C±2°C，相對(duì)濕度 90%±5% B:溫度 38°C±2°C，相對(duì)濕度 90%±5%

 

 

測定法 除另有規(guī)定外，選取厚度均勻，無皺褶、折痕、針孔及其他缺陷的供試品三片， 分別用圓片沖刀沖切，供試品直徑應(yīng)介于杯環(huán)直徑與杯子直徑之間。將干燥劑放入清潔的杯 皿中，加入量應(yīng)使干燥劑距供試品表面約 3mm 為宜。將盛有干燥劑的杯皿放入杯子中，然后 將杯子放到杯臺(tái)上，供試品放在杯子正中，加上杯環(huán)后，用導(dǎo)正環(huán)固定好供試品的位置，再 加上壓蓋。小心地取下導(dǎo)正環(huán)，將熔融的密封蠟澆灌至杯子的凹槽中，密封蠟?zāi)毯蟛辉试S 產(chǎn)生裂紋及氣泡。待密封蠟?zāi)毯?，取下壓蓋和杯臺(tái)，并清除粘在透濕杯邊及底部的密封蠟。在 23°C±2°C環(huán)境中放置 30 分鐘，稱量封好的透濕杯。將透濕杯放入已調(diào)好溫度、濕度的 恒溫恒濕箱中，16 小時(shí)后從箱中取出，放在處于 23°C±2°C環(huán)境中的干燥器中，平衡 30 分 鐘后進(jìn)行稱量，稱量后將透濕杯重新放入恒溫恒濕箱內(nèi)，以后每兩次稱量的間隔時(shí)間為 24、 48 或 96 小時(shí)，稱量前均應(yīng)先放在處于 23°C±2°C環(huán)境中的干燥器中，平衡 30 分鐘。直到前 后兩次質(zhì)量增量相差不大于 5%時(shí)，方可結(jié)束試驗(yàn)。同時(shí)取一個(gè)供試品進(jìn)行空白試驗(yàn)。按下 式計(jì)算水蒸氣透過量(WVT):

 

[附注]

(1)密封蠟 密封蠟應(yīng)在溫度 38°C、相對(duì)濕度 90%條件下暴露不會(huì)軟化變形。若暴露 表面積為 50 cm2，則在 24h 內(nèi)質(zhì)量變化不能超過 1mg。例如:石蠟(熔點(diǎn)為 50~52°C)與蜂 蠟的配比約為 85:15。

 

(2)干燥劑 無水氯化鈣粒度直徑為 0.60~2.36mm。使用前應(yīng)在 200°C±2°C烘箱中， 干燥 2 小時(shí)。

 

(3)每次稱量后應(yīng)輕微晃動(dòng)杯子中的干燥劑，使其上下混合。

 

(4)試驗(yàn)結(jié)束后，干燥劑吸濕總增量應(yīng)不得過 10%。

 

(5)空白試驗(yàn)系指除杯中不加干燥劑外，其它試驗(yàn)步驟同供試品試驗(yàn)。

 

(2)容器法 系指在規(guī)定的溫度、相對(duì)濕度環(huán)境下，包裝容器內(nèi)透入的水蒸氣量。一般 適用于口服固體制劑用包裝容器，如固體瓶等。

 

儀器裝置

恒溫恒濕箱 溫度精度為±0.6°C;相對(duì)濕度精度為±2%;風(fēng)速為 0.5~2.5m/s。恒溫 恒濕箱關(guān)閉之后，15 分鐘內(nèi)應(yīng)重新達(dá)到規(guī)定的溫、濕度。

 

分析天平 靈敏度為 0.1mg(當(dāng)稱重量大于 200g 時(shí)，靈敏度可不大于 1mg;當(dāng)稱重量大 于 1000g 時(shí)，靈敏度可不大于稱重量的 0.01%)。

 

試驗(yàn)條件 常用試驗(yàn)條件如下: A:溫度 40°C±2°C，相對(duì)濕度 75%±5% B:溫度 30°C±2°C，相對(duì)濕度 65%±5% C:溫度 25°C±2°C，相對(duì)濕度 75%±5%

 

測定法 除另有規(guī)定外，取試驗(yàn)容器適量，用干燥綢布擦凈每個(gè)容器，將容器蓋連續(xù)開、 關(guān) 30 次后，在容器內(nèi)加入干燥劑:20ml 或 20ml 以上的容器，加入干燥劑至距瓶口 13mm 處; 小于 20ml 的容器，加入的干燥劑量為容積的 2/3，立即將蓋蓋緊。另取兩個(gè)容器裝入與干 燥劑相等量的玻璃小球，作對(duì)照用。容器緊蓋后分別精密稱定，然后將容器置于恒溫恒濕箱 中，放置 72 小時(shí)，取出，用干燥綢布擦干每個(gè)容器，室溫放置 45 分鐘，分別精密稱定。按 下式計(jì)算水蒸氣透過量(WVT):

 

 

 

2. 減重法

本法系指在規(guī)定的溫度、相對(duì)濕度環(huán)境下，一定時(shí)間內(nèi)容器內(nèi)水分損失的百分比。一般 適用于口服、外用液體制劑用容器、輸液容器等包裝容器。

 

儀器裝置 恒溫恒濕箱 溫度精度為±0.6°C;相對(duì)濕度精度為±2%;風(fēng)速為 0.5~ 2.5m/s。恒溫恒濕箱關(guān)閉之后，15 分鐘內(nèi)應(yīng)重新達(dá)到規(guī)定的溫、濕度。

 

分析天平 靈敏度為 0.1mg (當(dāng)稱重量大于 200g 時(shí)，靈敏度可不大于 1mg;當(dāng)稱重量大 于 1000g 時(shí)，靈敏度可不大于稱重量的 0.01%)。

 

試驗(yàn)條件 常用試驗(yàn)條件如下: A:溫度 40°C±2°C，相對(duì)濕度 25%±5% B:溫度 25°C±2°C，相對(duì)濕度 40%±5% C:溫度 30°C±2°C，相對(duì)濕度 35%±5% 測定法 除另有規(guī)定外，取試驗(yàn)容器適量，在容器中加入水至標(biāo)示容量，旋緊瓶蓋，精密稱定。然后將容器置于恒溫恒濕箱中，放置 14 天，取出后，室溫放置 45 分鐘后，精密稱 定，按下式計(jì)算水分損失百分率:

 

 

第二法 電解分析法

本法系指水蒸氣遇電極電解為氫氣和氧氣，通過電解電流的數(shù)值計(jì)算出一定時(shí)間內(nèi)透過單位面積供試品的水蒸氣透過總量的水蒸氣透過量分析方法。

 

儀器裝置 水蒸氣透過量測定儀，儀器主要包括:

 

透濕室 上端測試皿為高濕腔，通常包含一個(gè)在飽和鹽溶液中浸泡過的毛玻璃板，以保 持供試品一端的恒定的濕度環(huán)境，下端為與電解槽相通。

 

電解傳感器 可定量測定在其中所攜帶的水蒸氣。試驗(yàn)條件 常用試驗(yàn)條件如下: A:溫度 23°C±0.5°C，相對(duì)濕度 85%±2% B:溫度 38°C±0.5°C，相對(duì)濕度 90%±2%

 

測定法 除另有規(guī)定外，選取厚度均勻，無皺褶、折痕、針孔及其他缺陷的供試品三片， 供試品應(yīng)在 23°C±2°C，相對(duì)濕度 50%±10%的條件下，進(jìn)行供試品調(diào)節(jié)，調(diào)節(jié)時(shí)間至少 4 小時(shí)。按儀器使用說明書，進(jìn)行試驗(yàn)操作，當(dāng)顯示的值穩(wěn)定后，測試結(jié)束(一般來說，電流 采樣值前后兩次相差不大于 5%時(shí)，可視為達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài))。所需相對(duì)濕度可通過鹽溶液調(diào)節(jié)。常用的溫濕度配制方法見表 1。

 

 

第三法 紅外檢測器法

本法適用于藥用薄膜或薄片等材料片材的水蒸氣透過量的測定。當(dāng)供試品置于測試腔 時(shí)，供試品將測試腔隔為兩腔。供試品一邊為低濕腔，另一邊為高濕腔，里面充滿水蒸氣 且溫度已知。由于存在一定的濕度差，水蒸氣從高濕腔通過供試品滲透到低濕腔，由載氣傳送到紅外檢測器產(chǎn)生一定量的電信號(hào)，當(dāng)試驗(yàn)達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)后，通過輸出的電信號(hào)計(jì)算 出供試品水蒸氣透過率。

 

儀器裝置 紅外透濕儀(圖 2)，由濕度調(diào)節(jié)裝置、測試腔、紅外檢測器、干燥管及流量 表等組成。高濕腔的濕度調(diào)節(jié)可采用載氣加濕的方式或飽和鹽溶液的方式調(diào)節(jié)，紅外檢測器 與低濕腔相連測定水蒸氣濃度。紅外傳感器對(duì)水蒸氣的靈敏度至少為 1μg/L 或 1mm3/dm3。

 

測定法:除另有規(guī)定外，選取具有代表性、厚度均勻、無皺褶、折痕、針孔及其他缺陷的適宜尺寸的供試品三片，供試品應(yīng)在 23°C±2°C，相對(duì)濕度 50%±10%的條件下，進(jìn)行供試 品調(diào)節(jié)，調(diào)節(jié)時(shí)間至少 4 小時(shí)。然后進(jìn)行試驗(yàn)，當(dāng)儀器顯示的值穩(wěn)定后，測試結(jié)束(一般來 說，輸出的電壓值或儀器顯示的水蒸氣透過率值前后兩次變化相差不大于 5%時(shí)，可視為達(dá) 到穩(wěn)定狀態(tài)。如果連續(xù)兩次輸出值變化未在 5%以內(nèi)，應(yīng)在報(bào)告里就試驗(yàn)終止情況加以說明)。

 

水蒸氣透過量(WVT)也可由儀器所帶的計(jì)算機(jī)分析軟件進(jìn)行直接計(jì)算得到，也可按下 式計(jì)算:

 

 

試驗(yàn)結(jié)果以三個(gè)供試品的算術(shù)平均值表示，除高阻隔性能供試品(水蒸氣透過量結(jié)果不大于0.5)外，每一個(gè)供試品測定值與平均值的差值不得超過平均值的±10%。

 

[附注]試驗(yàn)具體操作如零點(diǎn)漂移測定、載氣流量調(diào)節(jié)等應(yīng)根據(jù)所測材料阻隔性能的高低，按照儀器使用說明書的要求進(jìn)行。

 

起草單位:上海市食品藥品包裝材料測試所

 

復(fù)核單位:江西省藥品檢驗(yàn)檢測研究院

 

我委擬制定藥包材急性全身毒性檢查法、藥包材熱原檢查法、藥包材溶血檢查法和藥包材細(xì)胞毒性檢查法4個(gè)國家藥包材標(biāo)準(zhǔn)，為確保標(biāo)準(zhǔn)的科學(xué)性、合理性和適用性，現(xiàn)將擬制定的藥包材急性全身毒性檢查法、藥包材熱原檢查法、藥包材溶血檢查法和藥包材細(xì)胞毒性檢查法4個(gè)國家藥包材標(biāo)準(zhǔn)第二次公示征求社會(huì)各界意見（詳見附件）。公示期為一個(gè)月。請(qǐng)相關(guān)單位認(rèn)真研核，若有異議，請(qǐng)及時(shí)來函提交反饋意見，并附相關(guān)說明、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和聯(lián)系方式。來函需加蓋公章，收文單位為“國家藥典委員會(huì)辦公室”，同時(shí)將公函掃描件電子版發(fā)送至指定郵箱。公示期滿未回復(fù)意見即視為對(duì)公示標(biāo)準(zhǔn)草案無異議。聯(lián)系人：康笑博電 話：010-67079620電子郵件：421@chp.org.cn收文單位：國家藥典委員會(huì)辦公室地 址：北京市東城區(qū)法華南里11號(hào)樓郵 編：100061附件：藥包材急性全身毒性檢查法公示稿（第二次）.pdf藥包材熱原檢查法公示稿（第二次）.pdf藥包材溶血檢查法公示稿（第二次）.pdf藥包材細(xì)胞毒性檢查法公示稿（第二次）.pdf國家藥典委員會(huì)2019年9月30日

 

藥包材急性全身毒性檢查法本法系將一定劑量的供試品液注入小鼠體內(nèi)，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)觀察小鼠有無毒性反應(yīng)和死 亡情況，以判定供試品是否符合規(guī)定的一種方法。試驗(yàn)動(dòng)物 試驗(yàn)用小鼠應(yīng)健康合格。須在同一飼養(yǎng)條件下飼養(yǎng)，同一來源，同一品種， 性別不限，體重17 g~23g。同一性別的動(dòng)物體重差異應(yīng)不超過平均值的±20%。如使用雌 性動(dòng)物，宜未育并無孕。做過本試驗(yàn)的小鼠不得重復(fù)使用。將小鼠隨機(jī)分為試驗(yàn)和對(duì)照兩組， 每組5只。復(fù)試時(shí)每組取18g~19g的小鼠10只。供試品液的制備 制備過程應(yīng)按無菌操作法進(jìn)行。必要時(shí)，制備供試品液前先將供試品 置高壓滅菌器內(nèi)115°C保持30分鐘。未滅菌供試品根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行滅菌處理。除另有規(guī) 定外，按品種項(xiàng)下規(guī)定的提取介質(zhì)制成供試品液，提取介質(zhì)示例:a) 0.9%氯化鈉注射液;b)新鮮精制植物油(如棉籽油等);c)1:20乙醇0.9%氯化鈉注射液溶液;d) 聚乙二醇400(PEG400)。提取時(shí)應(yīng)對(duì)供試樣品進(jìn)行分割，以使供試品能夠放入容器并浸沒在提取介質(zhì)中進(jìn)行充分提取，除另有規(guī)定外，切成0.5cm×3cm條狀。不計(jì)算因分割而產(chǎn)生的表面積增加。由于完 整表面與切割表面可能存在潛在的提取性能差異，必要時(shí)可保持供試品的完整性。除有明確 規(guī)定的濃度和提取條件外，照下列表1和表2方式制備供試品液。所選擇的提取條件不應(yīng)該 引起供試品物理形態(tài)的改變。對(duì)照液 提取介質(zhì)(不含有供試品)以相同的方式制備作為對(duì)照液。供試品液和對(duì)照液應(yīng)在制備后24h內(nèi)使用，注射前劇烈振蕩，確保可提取物充分混勻。

 

 

檢查法 按照表3規(guī)定各組5只小鼠分別注射供試品液或?qū)φ找海⑸渌俣葹?.1ml/s。PEG400供試品液及介質(zhì)對(duì)照液在注射前應(yīng)使用0.9%氯化鈉注射液以4.1倍稀釋至終濃度200mg/ml后注射。注射后觀察小鼠即時(shí)反應(yīng)，并于4h、24h、48h、72h觀察和記錄試驗(yàn)組 和對(duì)照組動(dòng)物的一般狀態(tài)、毒性表現(xiàn)和死亡動(dòng)物數(shù)。在72h時(shí)稱量動(dòng)物體重，動(dòng)物反應(yīng)觀察 判定按表4進(jìn)行。

 

 

結(jié)果判定 如果觀察期內(nèi)供試品組動(dòng)物的毒性反應(yīng)不顯著大于對(duì)照組動(dòng)物，則判定供試 品合格。如果供試品組動(dòng)物有2只或2只以上出現(xiàn)中度毒性癥狀或死亡，或有3只或3只以 上動(dòng)物體重下降大于2g，則供試品不合格。如任何一供試品組動(dòng)物顯示有輕度的毒性反應(yīng)， 并且不超過1只動(dòng)物顯示有中度毒性反應(yīng)的大體癥狀或死亡，則另取10只動(dòng)物進(jìn)行復(fù)試。在72h觀察期內(nèi)，供試品組動(dòng)物的反應(yīng)不大于對(duì)照組動(dòng)物，判定供試品合格。起草單位:山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心 電話:0531-82682901復(fù)核單位:上海市食品藥品包裝材料測試所、北京市藥品檢驗(yàn)所

 

藥包材熱原檢查法本法系將供試品液靜脈注入家兔體內(nèi)，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)，觀察家兔體溫升高情況，以判定 供試品中所含熱原的限度是否符合規(guī)定。試驗(yàn)動(dòng)物:應(yīng)符合熱原檢查法(中國藥典四部通則1142)中供試用家兔的規(guī)定。試驗(yàn)前的準(zhǔn)備:應(yīng)符合熱原檢查法(中國藥典四部通則1142)中試驗(yàn)前準(zhǔn)備的規(guī)定。供試品液制備:制備過程應(yīng)按無菌操作法進(jìn)行。將供試品用純化水沖洗干凈，用濾紙吸干。除另有規(guī)定外，切成0.5cm×3cm條狀，不計(jì)算因分割而產(chǎn)生的表面積增加。除另有規(guī) 定外，供試品置高壓滅菌器內(nèi)115°C保持30分鐘。照下列表1和表2方式制備供試品液。供試品液應(yīng)在制備后2h內(nèi)使用。

 

 

藥包材溶血檢查法本法系通過供試品與血液接觸，測定紅細(xì)胞釋放的血紅蛋白量以檢測供試品體外溶血程 度的一種方法。試驗(yàn)前的準(zhǔn)備 除另有規(guī)定外，采集健康家兔新鮮血液至抗凝采血管中，常見抗凝劑 有3.2%枸櫞酸鈉或2%草酸鉀。取新鮮抗凝兔血8ml，加入0.9%氯化鈉注射液10ml稀釋。供試品的制備 稱取3份供試品，每份5g，除另有規(guī)定外，一般切成0.5cm×2cm條狀。由于完整表面與切割表面可能存在潛在的提取性能差異，必要時(shí)可保持供試品的完整性。檢查法 除另有規(guī)定外，供試品組3支試管，每管加入供試品5g及0.9%氯化鈉注射液10ml;陰性對(duì)照組3支試管，每管加入0.9%氯化鈉注射液10ml;陽性對(duì)照管組3支試管， 每管加入純化水10ml。全部試管放入(37±l)°C恒溫水浴中保溫30分鐘后，每支試管加入0.2ml稀釋兔血，輕輕混勻，置(37±l)°C水浴中繼續(xù)保溫60分鐘。倒出管內(nèi)液體離心5分鐘 (2500r/min)。吸取上清液移入比色皿或酶標(biāo)儀內(nèi)，按照分光光度法(中國藥典四部通則0401)，于545nm波長處測定吸光度。結(jié)果計(jì)算 供試品組和對(duì)照組吸光度均取3支管的平均值。陰性對(duì)照管的吸光度應(yīng)不 大于0.03;陽性對(duì)照管的吸光度應(yīng)為0.8±0.3，否則重新實(shí)驗(yàn)。按下式計(jì)算

 

 

藥包材細(xì)胞毒性檢查法本法系將供試品或供試品液接觸細(xì)胞，通過對(duì)細(xì)胞形態(tài)、增殖和抑制影響的觀察，評(píng)價(jià) 供試品對(duì)體外細(xì)胞的毒性作用。試驗(yàn)用細(xì)胞 推薦使用小鼠成纖維細(xì)胞L-929。試驗(yàn)時(shí)采用傳代48~72h生長旺盛的細(xì) 胞。試驗(yàn)前的準(zhǔn)備 與樣品及細(xì)胞接觸的所有器具均需無菌。必要時(shí)可采用濕熱滅菌如115°C保持30分鐘;干熱滅菌如250°C保持30分鐘或用180°C保持2h。供試品液的制備 提取介質(zhì)的選擇宜反映出提取的目的，優(yōu)先選用含血清哺乳動(dòng)物細(xì)胞 培養(yǎng)基作為提取介質(zhì)。除另有規(guī)定外，按品種項(xiàng)下規(guī)定的提取介質(zhì)制成供試品液。將供試品 切成0.5cm×2cm條狀，用濕熱滅菌或紫外線照射消毒后，置玻璃容器內(nèi)。除另有規(guī)定外， 按表1選擇提取比例，使提取液浸沒供試品，按表2選擇提取條件(若采用含血清培養(yǎng)基， 應(yīng)用(37±1)°C的條件)。

 

 

1.相對(duì)增殖度法陰性對(duì)照液制備 為不加供試品的細(xì)胞培養(yǎng)液。陽性對(duì)照液制備 取生物毒性陽性參比物質(zhì)，照供試品制備項(xiàng)下的規(guī)定進(jìn)行，如6.3%苯 酚的細(xì)胞培養(yǎng)液。

 

檢查法取33個(gè)培養(yǎng)瓶，分別加入4×104個(gè)/ml濃度細(xì)胞懸液1ml，細(xì)胞培養(yǎng)液4ml， 置(37±1)°C，(5±1)%CO2的條件下培養(yǎng)24h。培養(yǎng)24h后棄去原培養(yǎng)液。

 

陰性對(duì)照組:取13個(gè)培養(yǎng)瓶加入5ml陰性對(duì)照液;陽性對(duì)照組 取10個(gè)培養(yǎng)瓶加入5ml陽性對(duì)照液;試驗(yàn)組:取10個(gè)培養(yǎng)瓶加入5ml含50%供試品液的細(xì)胞培養(yǎng)液，置(37±1)°C， (5±1)% CO2的條件下繼續(xù)培養(yǎng)7天。細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察和計(jì)數(shù):在更換細(xì)胞培養(yǎng)液的當(dāng)天，取3瓶陰性對(duì)照組，并在更換后第2、4、7天，每組各取3瓶進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)觀察和細(xì)胞計(jì)數(shù)。毒性評(píng)定細(xì)胞形態(tài)分析標(biāo)準(zhǔn)按表3規(guī)定。

 

 

結(jié)果評(píng)價(jià)試驗(yàn)組相對(duì)增殖度(以第7天的細(xì)胞濃度計(jì)算)為0級(jí)或1級(jí)判為合格。試驗(yàn)組相對(duì)增殖度為2級(jí)，應(yīng)結(jié)合形態(tài)綜合評(píng)價(jià)，輕微毒或無毒的判為合格。試驗(yàn)組相對(duì)增殖 度為3級(jí)~5級(jí)判為不合格。

 

2瓊脂擴(kuò)散法供試品制備 將樣品用純化水沖洗干凈(根據(jù)實(shí)際情況需要)，用濾紙吸干。若用供試品液進(jìn)行試驗(yàn)，將制備的供試品液附著到生物惰性吸收性的基質(zhì)(例如超細(xì)硼硅玻璃纖維濾紙)上，制成面積不少于100mm2的圓形供試品。陰性對(duì)照制備 取無生物毒性陰性參比物質(zhì)，例如高密度聚乙烯。按照供試品制備項(xiàng)下的規(guī)定進(jìn)行。陽性對(duì)照制備 取生物毒性陽性參比物質(zhì)，例如含二乙基二硫代氨基甲酸鋅的聚氨酯(ZDEC)。按照供試品制備項(xiàng)下的規(guī)定進(jìn)行?？刹捎?0%二甲基亞砜(DMSO)溶液，附著到 生物惰性吸收性(例如超細(xì)硼硅玻璃纖維濾紙)的基質(zhì)上。

 

檢查法取細(xì)胞懸浮液(1×105個(gè)/ml)7ml，均勻分散至直徑60mm的培養(yǎng)皿中。置于含(5±1)%CO2氣體的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h至近匯合單層細(xì)胞，棄去培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基，將溶化瓊脂冷卻至48°C左右與含20%血清的2倍新鮮哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基混合，使瓊脂最終質(zhì)量濃度不大于2%，在每只培養(yǎng)皿內(nèi)加入新制備的含瓊脂培養(yǎng)基(要足夠薄以利于可瀝濾物的擴(kuò)散)。含瓊脂培養(yǎng)基凝固后，可用適當(dāng)?shù)娜旧椒ㄈ旧⒐┰嚻贰㈥幮詫?duì)照、陽性對(duì)照小心 地放在培養(yǎng)皿的固化瓊脂層表面。每個(gè)供試品、陰性對(duì)照、陽性對(duì)照試樣間盡量保持合適的距離并遠(yuǎn)離培養(yǎng)皿壁，每一培 養(yǎng)皿中放置不超過3個(gè)試樣，每個(gè)試樣至少設(shè)置2個(gè)平行。置(37±1)°C含(5±1)% CO2的 細(xì)胞培養(yǎng)箱中至少培養(yǎng)(24±2)h。用顯微鏡觀察每個(gè)供試品、陰性對(duì)照、陽性對(duì)照試樣反應(yīng) 區(qū)域。用活體染料如中性紅可有助于檢測細(xì)胞毒性。

 

結(jié)果評(píng)價(jià)按表5進(jìn)行細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)和分級(jí)。如陰性對(duì)照為0級(jí)(無毒)、陽性對(duì)照不小于3級(jí)(中 度毒)，則細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)系統(tǒng)有效。

 

 

檢測提取液時(shí)，供試品液的反應(yīng)區(qū)域應(yīng)減去介質(zhì)對(duì)照的反應(yīng)區(qū)域，再進(jìn)行毒性分級(jí)。供試品和/或供試品液細(xì)胞毒性分級(jí)不大于2級(jí)(輕度毒)時(shí)，則判為合格。

 

3直接接觸法供試品制備 采用供試品的平整部分，表面積不小于100mm2。陰性對(duì)照制備 取高密度聚乙烯參比物質(zhì)，照供試品制備項(xiàng)下的規(guī)定進(jìn)行。陽性對(duì)照制備 取生物毒性陽性參比物質(zhì)，照供試品制備項(xiàng)下的規(guī)定進(jìn)行。

 

檢查法取生長旺盛的細(xì)胞懸浮液(1×105個(gè)/ml)2ml，置直徑35mm的平皿中培養(yǎng)單層細(xì)胞。置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h至近匯合單層細(xì)胞，吸去培養(yǎng)基，替換為0.8ml的新鮮培養(yǎng)基。在每個(gè)培養(yǎng)皿中單獨(dú)放置1個(gè)供試品、陽性對(duì)照或陰性對(duì)照，每個(gè)試樣至少設(shè)置2個(gè)平行。將所有的培養(yǎng)物置(37±1)°C含(5±1)% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中至少培養(yǎng)24h，培養(yǎng) 箱宜保持適當(dāng)?shù)臐穸?。顯微鏡下觀察每個(gè)供試品、陰性對(duì)照、陽性對(duì)照周圍，必要時(shí)應(yīng)進(jìn)行 染色。

 

結(jié)果評(píng)價(jià)按照瓊脂擴(kuò)散法結(jié)果評(píng)價(jià)項(xiàng)下的規(guī)定進(jìn)行。若樣品不超過2級(jí)(輕微毒)，則 樣品判為合格。若試驗(yàn)系統(tǒng)無效需重復(fù)試驗(yàn)過程。

 

4提取法陰性對(duì)照制備 取高密度聚乙烯參比物質(zhì)，照供試品溶液制備項(xiàng)下的規(guī)定進(jìn)行。陽性對(duì)照制備 取生物毒性陽性參比物質(zhì)，照供試品溶液制備項(xiàng)下的規(guī)定進(jìn)行。檢查法 取生長旺盛的細(xì)胞懸浮液(1×105個(gè)/ml)2ml，置直徑35mm的平皿中培養(yǎng)單層細(xì)胞。培養(yǎng)不少于24h細(xì)胞至少達(dá)到80%近匯合后，吸去培養(yǎng)基，替換為供試品液、陰性 對(duì)照液或陽性對(duì)照液。含血清培養(yǎng)基提取液和不含血清培養(yǎng)基提取液無需稀釋，平行試驗(yàn)2份。0.9%氯化鈉注射液為介質(zhì)的提取液用含血清的細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋至提取液濃度為25%， 平行試驗(yàn)2份。所有的培養(yǎng)物在(37±1)°C，含(5±1)%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h。48h后， 在顯微鏡下觀察培養(yǎng)物，如有必要，進(jìn)行染色。結(jié)果評(píng)價(jià) 按表6進(jìn)行毒性評(píng)價(jià)和分級(jí)。若試驗(yàn)系統(tǒng)不成立，重復(fù)試驗(yàn)。供試品不超過2級(jí)(輕微毒)，則判為合格。如需進(jìn)行劑量-反應(yīng)程度評(píng)價(jià)，可通過定量稀釋供試品液，重復(fù)試驗(yàn)。

 

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